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植物组织培养的技术原理
http://flower.intopet.com 日期:2006-10-12 来源:中国花卉报 作者:广西大学林学院 崔会平 阅读:
能伴随着广泛的变异,这种变异称为体细胞无性系变异。植物体细胞无性系变异是遗传变异的重要来源之一,它具有变异广泛、后代较稳定、基本保持原品种特性等优点。
  (2)远缘杂交种后代的获得百合、鸢尾等许多花卉虽然可以进行远缘杂交,但是由于生理代谢等方面的原因,常使杂种胚早期败育,因而得不到杂种植物。而在试管中进行胚培养,可使其顺利生长,得到远缘杂种。
  (3)草花育种组织培养是应用较早,比较成熟的一项技术,在草花育种中主要用作其他育种手段的辅助技术。例如,当某一变异植株上具有优良性状而尚未确定该性状能否遗传时,可用茎尖组培技术扩繁,增加供试材料,防止有益变异的组织丢失。另外,诱导胚状体过程中常产生变异,因而组培也是一种引发变异的育种手段。同时,细胞在离体培养过程中会产生广泛的无性系变异,通过协迫培养,可以获得具有相应耐性的愈伤组织,诱导产生再生体植株,从而获得耐性遗传。
  (4)花卉品种的提纯复壮运用组织培养,苗木的复壮过程很明显,对于长期运用无性方法繁殖并开始退化的花卉品种,如康乃馨采用组培方法繁殖,可使个体发育向年轻阶段转化。
  二、花卉组织培养的途径1.生长点途径通过诱导茎尖或侧芽,形成大量腋芽,从而获得大量幼小植株。此途径产生变异的机会较小,所获瓶苗的品质也较均匀。多数花卉植物的组培苗都采用这一途径进行快速繁殖。
  2.胚状体途径通过诱导植物体细胞或组织产生胚状体,再由胚状体发育成大量植株。此途径较易产生变异。一品红、苏铁等通常采用此途径进行繁育。
  3.愈伤组织途径外植体经植物生长调节剂处理后先形成愈伤组织,再经器官分化形成许多芽体,达到大量繁殖的目的。此途径产生变异的机会比其他两种途径都大。
  三、组织培养对实验室的要求花卉组织培养是在人工控制的条件下培养花卉,是一种花卉现代工厂化生产新技术,所以其对实验室及设备有一定的要求。
  1.实验室方面(1)化学实验室:主要承担配制培养基的任务。要求具有各种化学药品试剂、各种玻璃器皿、称量天平等。
  (2)准备室:主要进行玻璃器皿的洗涤,要求有上下水装置。进行培养基础用具的消毒。要有高压灭菌锅,具有水源和电源。
  (3)接种室:是花卉材料分离、消毒接种和转移的场所。要求密闭、清洁、整齐,装有紫外灯,能随时灭菌。
  (4)培养室:是花卉材料培养生长的地方。要求清洁、保温好、室温均匀一致,并有绝热、防火性能。
  为了保证接种室和培养室清洁无菌以及减少由于环境污染进而导致培养基污染而造成的浪费,建议最好安装十万级的净化设备,用物理灭菌手段代替化学灭菌,达到减少环境污染,实现可持续发展。
  2.设备方面(1)天平:供配制培养基时称量药品和激素用。大量元素用普通天平;微量元素和激素用分析天平。
  (2)酸度计:测定培养基的pH值。
  (3)高压灭菌锅:用来供培养基和器械用具灭菌。
  (4)烘箱:用于洗净的玻璃器皿干燥灭菌。
  (5)蒸馏水制造装置:用来得到纯净水,供培养用。
  (6)冰箱:供贮放母液和植物材料用。
  (7)接种箱或超净工作台:为植物材料接种或转移的操作场所。
  (8)空调机:控制室温用。四、花卉组织培养对培养基的要求培养基是花卉植物组织培养中十分重要的基质,目前应用的有很多种,但其主要成分大体相同。除主要成分是水外,其他还有大量元素、微量元素、维生素、生长调节物质、蔗糖和琼脂等。
  目前花卉组织培养中应用最多的为MS培养基。其组成是在配制1升培养基时,加硝酸铵1.65克、硝酸钾1.9克、氯化钙0.44克、硫酸镁0.37克、磷酸二氢钾0.17克、碘化钾0.83毫克、硼酸5.2毫克、硫酸镁22.3毫克、硫酸锌3.6毫克、铂酸钠0.25毫克、硫酸铜0.025毫克、氯化钴0.025毫克、硫酸铁27.8毫克、蔗糖20至40克和琼脂4至10克。其他生长调节物质要根据花卉的种类和培养目的而确定。
  配制培养基前要准备好烧杯、量筒、吸管、容量瓶等玻璃仪器,预先称好药品用蒸馏水溶解,分别配制成10倍或100倍母液备用。配制培养基时准备好培养瓶,可以是三角瓶也可以用目前市场上推出的塑料瓶、大烧杯、分液器等仪器,配制时先将琼脂溶化,再加入各种母液和蔗糖,然后用1摩尔的氢氧化钠或盐酸调整培养基的pH值,一般掌握在5.8左右。以后可分注到培养瓶中,盖好瓶盖。培养基配好要经高压灭菌,冷却后放到培养室预培养3天,如没有杂菌污染,才可进行花卉材料的接种。
  五、组培法繁殖花卉的基本阶段1.外植体材料的选取从理论上讲,越是具有全能性的部位其组培的成功性就越高。植物具有全能性的细胞通常有三类:一是受精卵;二是发育中的分生组织细胞,

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