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园艺作物育种浅谈——染色体工程
http://flower.intopet.com 日期:1995-2-7 来源:中国花卉报 作者:王玉元 阅读:

染色体计数对大多数植物细胞有丝分裂的观察和染色体计数,最适宜的方法是用根尖压片。材料最好使用培养瓶中生长旺盛的植株,并依不同的园艺作物品种,按其在一天中细胞分裂的高峰期取材固定,才能获得较多的分裂相。具体的适宜时间可参考有关的资料和经试验确定。操作方法是:将2至4毫米长的根尖切取后,立即浸入对二氯苯水溶液中,在室温下处理1.5小时左右,最长不能超过3小时,随即将材料转移到酒精:冰醋酸(3:1)固定液中,在室温下固定3至24小时。若在冰箱中固定,保存的时间更长。在没有冷冻的条件下,如需长期保存,可将材料转移到80%的酒精中,并须将固定瓶口封严.制作根尖压片须先将材料软化,方法是先将根尖从固定液中转移到10%的盐酸中,在60℃的恒温箱中处理10分钟或更长的时间,根据不同材料而不同。在没有恒温箱的条件下,也可以将材料放在室温下处理1至2小时。而后用蒸馏水迅速冲洗。在压片的制作过程中,通常用醋酸地衣红染色液。它的制备方法是:将一克地衣红溶解在45毫升的热冰醋酸中,待冷却后用蒸馏水稀释到100毫升,边稀释边搅动,而后再进行过滤。将洗过的根尖放在盛有上述染色液的浅玻璃器皿中染色30分钟到3小时,随即将染色液弃去,用镊子将根尖取出并放在载玻片上。用刀片切去根冠,再用解剖针将根尖切开,滴上一滴45%的醋酸,或将染色液滴在根尖上。将放有材料的载玻片在酒精灯上加热不超过两秒钟,盖上盖玻片,先用大拇指将材料压平,再用带有橡皮头的铅笔,轻轻敲打,而后在盖玻片上放一块滤纸,慢慢用拇指加压,以吸去多余的染液,此时应特别注意不能使盖玻片横向移动。此方法尽管简单,但要制出有分散好的染色体分裂相压片,却并非易事,需要不断实践才能取得较好的效果。

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